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荧光显微镜构造和荧光显微镜光源

荧光显微镜构造和荧光显微镜光源

荧光显微镜是众多光学显微镜中的一种。

(一)荧光显微镜光源——荧光光源

现在多采用200W的超高压汞灯作荧光光源,它是用石英玻璃制作,中间呈球形,内充一定数量的汞,工作时由两个电极间放电,引起水银蒸发,球内气压迅速升高,超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外光和蓝紫光,足以激发各类荧光物质。

(二)滤色系统

滤色系统是荧光显微镜的重要部位,主要由激发滤光片和阻断滤光片组成。激发滤光片,位于光源和标本之间,仅允许能激发标本产生荧光的光通过,激发滤光片有四组:紫外光(U)、紫光(V)、蓝光(B)、绿光(G);阻断滤光片,位于标本与目镜之间,可吸收和阻挡激发光进入目镜并把剩余的紫外线吸收掉,以免干扰荧光和损伤眼睛,还可选择并让特异的荧光透过,只让激发出的荧光通过,这样有利于增强反差。激发滤光片和阻断滤光片必须选择配合使用。

(三)反射荧光装置

通过反射荧光装置将激发光经过物镜向下落射到标本表面。其反光镜的反光层一般是镀铝的,因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少,反射达90%以上,而银的反射只有70%,一般使用平面反光镜。

(四)聚光镜

专为荧光显微镜设计制作的聚光镜是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成。

根据成像光路的特点,荧光显微镜可分为透射荧光显微镜和落射荧光显微镜。

透射式:激发光来自被检物体的下方,聚光镜为暗视野聚光镜,使激发光不进入物镜,而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮,而高倍则暗,在油浸和调中时,较难操作,尤以低倍的照明范围难于确定,但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。 这是比较旧式的荧光显微镜。但在低倍镜时荧光强,所以对观察较大的标本材料较好。

落射荧光显微镜是激发光从物镜向下落射到标本表面,物镜起着照明聚光镜和收集荧光的作用。光路中双色束分离器与光轴呈45°角,把激发光反射到物镜中,并聚集在样品上,样品所产生的荧光以及由物镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜,再返回到双色束分离器,使激发光和荧光分开,残余激发光被阻断滤片吸收。选择不同的激发滤光片/双色束分离器/阻断滤光片的组合插块,可满足不同荧光反应产物的需要。落射荧光显微镜的优点是视野照明均匀,成像清晰,放大倍数愈大荧光愈强。透射式目前几乎被淘汰,新型的荧光显微镜多为落射式,光源来自被检物体的上方,在光路中具有分光镜,所以对透明和不透明的被检物体都适用.

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